产品介绍:
EBERLAB™细菌蛋白提取试剂(EBERLAB™ Bacterial Protein Extraction Reagent),是一种无需超声或高压破碎,能快速、高质量、高产量、高活性地直接裂解并抽提大肠杆菌表达的重组蛋白以及大肠杆菌自身表达的可溶性蛋白的细菌活性蛋白提取试剂。本产品非常适合快速高通量的蛋白表达和筛选以及鉴定蛋白是否表达。
本产品是一种含有特定的经过精心筛选以确保蛋白抽提效果良好的比较温和的非变性去垢剂的缓冲液,所提取的蛋白通常能很好地保持蛋白原有的结构和生物学活性,可用于多种生物化学和分子生物学用途,兼容常见下游实验操作如His或GST等标签蛋白的纯化、ELISA、Western blot、IP、酶活性检测、荧光蛋白检测等。
本产品经过优化,适用于BL21菌,也同样适用于DH5ɑ、JM109以及其它类似的细菌。
本产品可以替代Sigma的CelLytic™ B 系列,Thermo的B-PER®系列等产品。
实验操作:
A. 小体积新鲜菌液(用于蛋白表达鉴定,酶活鉴定,高通量筛选):
① 将摇好的 1-2 菌液高速离心(≥12000rpm)30 秒,倒掉培养基。
② 加入原菌液体积 1/20 本品并用涡旋仪充分重悬后,室温振荡 10min(可置于 220 rpm 摇床中振荡)。
③ 最高转速(≥20000g)4℃离心 10 分钟,吸取上清用于下游鉴定。
B. 大体积菌液(新鲜菌或冻存菌)目的蛋白抽提:(以 50 ml 菌液为例)
① 菌液离心后去上清,加入 2.5ml 的本品,用涡旋仪充分重悬至无明显菌块。
② 室温振荡 15-20min(可置于 220 rpm 摇床中振荡)。
③ 最高转速 4℃离心 10 分钟,吸取上清备用,若上清明显粘稠,可加入适量全能核酸酶 (E1001)以降低粘稠度。
注意: 为尽可能彻底裂解菌体,裂解液的用量可加大至原始菌液体积的十分之一,并在重悬菌体后加入终浓度 1mg/ml 的溶菌酶,及适量全能核酸酶。
建议搭配本公司的蛋白快速电泳缓冲液和蛋白胶快速染色液,可实现全程(电泳+染色) 25min 观察到蛋白条带。
100ml/500ml
瓶
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