酶联免疫吸收分析,即ELISA是以体外抗原抗体反应为基础,将抗原抗体特异性反应与酶的高效催化作用相结合的一种检测方法,灵敏度可达皮克(pg/mL)水平。它是目前商业应用最为成熟的免疫分析方法之一,在医学实验、临床诊断、生物制药方面的运用也极为广泛。目前,常见的ELISA类型有四种:双抗夹心法、直接法、间接法和竞争法。
双抗体夹心法,其基本原理是将定量的包被抗体以物理吸附的方法固定于微孔板表面,然后加入待检标本,通过加入检测抗体,酶标记第二抗体后用TMB底物显色,TMB 在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下 转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的待测抗原呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度(O.D.值),用于样本中待测抗原浓度测算。微孔板中颜色的深浅与待测物的浓度呈正相关。
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